蘭花-嘉得利亞蘭
有誰知道嘉得利亞蘭花能做什麼組培實驗??
最好能把實驗結果和過程詳細告知一下
謝謝各位~幫我解答 ^^"
◎利用生長點組織培養繁殖的幼苗稱分生苗(Mericlone)。這是1960年法 國莫雷爾 博士(Morel),在研究毒素病治療時所發現。生長點組織培養又稱分裂性無性繁殖。其過程就是切取蘭花的生長點,放在培養基上,經一個多月,細胞組織即會分裂成數個芽球體,經過分割,就會從傷口處長出更多的芽球體。若加以連續分割,培養後再重覆分割,每個月增加四倍來計算,一年之內就可產生400萬個芽球體,每一個芽球體經過培養,都會發育成一株蘭花。如果這個生長點是來自一株名花,一年之內就能分生複製400萬株名花,數量及速度極為驚人,為其他繁殖法所不及。這種生物工程技術,目前應用在東亞蘭.嘉德麗雅蘭.蝴蝶蘭.拖鞋蘭.石斛蘭.萬代蘭等,都已獲得成功。
○嘉德麗雅蘭生長點組織培養共有六大步驟:1.準備器具。2.調製培養基。3.高壓殺菌鍋殺菌。4.切取生長點。5.培養芽球。6.分割芽球。切取生長點之技術,必須要有多次經驗才能得心應手,大竟全功,但如果親本帶有毒素病,切取組織塊越大,帶病的比例就越高。通常切取的大小約在0.2cm左右,原則上越小越安全,切取的技術就要更精練了。嘉德麗雅蘭在組織培養過程中,最大的障礙就是褐變死亡率甚高,因此如何減少褐變物質產生是培養的重要關鍵。嘉德麗雅蘭的培養基有數種配方可用,初期用液體再移植於固體培養基內,PH值以保持5~5.5為佳。培養溫度在25~ 30℃下褐變最高,15~ 20 ℃下褐變率最低,所以在本省培養作業應避免在5~9月間進行,10~2月天氣冷涼時成功率較高。
◎MS培養基調配法：下列五種溶液均貯藏於冰箱中,使用時再加以調配。各種化學藥品,可到化工原料行購買。添加物另有Hyponex 7-6-19 (花寶一號).果汁.活性碳等材料,個人之添加量常被視為秘方。
-溶液1: NH4NO3硝酸銨-165g 、KNO3硝酸鉀-190g 、KH2PO4磷酸二氫鉀-17g 、H3BO3硼酸-620mg、MnSO4.4H2O硫酸錳-2230mg、ZnSO4.4H2O硫酸鋅-860mg、Kl碘化鉀-83mg、Na2.MoO4.2H2O鉬酸鈉-25mg、CuSO4.5H2O硫酸銅-2.5mg、CoCl2.6H2O氯化鈷-2.5mg。
*以1.5公升的蒸餾水,遞次使上述各項化合物溶解後,再添加至2公升。(50倍溶液)。
-溶液2: CaCl2.2H2O氯化鈣 - 44g 。溶解於蒸餾水內,使其成為1公升。(100倍溶液)
-溶液3: MgSO4.7H2O硫酸鎂 - 37g 。溶解於蒸餾水內,使其成為1公升。(100倍溶液)
-溶液4: FeSO4.7H2O硫酸亞鐵-2.78g 、Na2 EDTA -3.73g 溶解於蒸餾水內,使其成為1公升 。(100倍溶液)。
-溶液5: Thiamine維他命B1 -20g 、Nicotinic Acid菸酸 -100mg、Pyridoxine維他命B6-100mg、Myo-lnositol肌醇 -20mg、Glycine甘氨酸-400mg。溶解於蒸餾水內,使其成為1公升 。(200倍溶液)。
○調配方法：
1)蒸餾水(500ml)+溶液1(20ml) )+溶液2(10ml) )+溶液3(10ml) )+溶液4(10ml) )+溶液5(5ml)+蔗糖( 30g )添加蒸餾水至1公升(調配1公升為例)。
2)添加已溶解過的NAA(植物荷爾蒙)10ml,BA(胞質分裂素)1ml。(分別用濃度為100PPM之溶液;即各取20mg,NAA先溶在少量酒精,BA溶在少量微鹼性水分,加水至20ml而成。)
3)以磁質攪拌器或玻璃棒攪拌,使其混合。
4)利用1規度(N)的鹽酸(HCl).KOH及NaOH,調整PH至5.7~5.8之間(可用PH儀表或試紙測試)。
5)添加洋菜7~ 10g 加熱使洋菜完全溶解。(注意調節硬度)
6)再用漏斗將培養基分別注入三角瓶。
7)瓶口蓋上橡皮塞。(瓶塞中央的孔隙已塞入棉花)
8)用高壓殺菌鍋以壓力1.1~ 1.2kg /c㎡,殺菌15~20分鐘。
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